遺伝子組換え植物におけるゲノムおよびmRNA発現個体の迅速選抜手法の検討
秋吉 美穂・吉田 光毅・遠藤 昇
 遺伝子組換え植物の一般的な作出工程においては、目的とする外来遺伝子を植物に導入し、幼苗まで育成した後、ゲノムDNAを抽出して目的遺伝子が入っているかどうかを確認する必要がある。さらにその遺伝子がmRNAに転写されているかどうか、個体からRNAを抽出して調べる必要がある。ゲノムDNAおよびmRNAの確認には、簡便さからPCR技術が利用されることが多い。
 そこで、100個体以上の組換え体から、導入遺伝子がはいった個体を迅速に選抜するために、ゲノムDNAの簡易抽出法について検討した。その結果、従来の1/2の期間で選抜することが可能となった。さらに、mRNAの確認作業も実施した。これら一連の実験手法について検討した結果を報告する。
キーワード:  植物,遺伝子組換え,遺伝子導入,PCR,ゲノムPCR,RT-PCR
A Quick and Efficient Technique for Detecting the Foreign DNAs and Their Expression in Large Transgenic Plant-Populations
Miho AKIYOSHI, Kohki YOSHIDA and Noboru ENDO
It is generally required for the genetic manipulation to confirm whether introduced DNAs were effectively transformed into the plant genome and whether the foreign gene is fairly expressed. In order to select 100 or more individual plants containing target DNA or transcribed mRNA, quick and time-saving technique may play an important role. Because of simplicity, PCR technique has been used in many cases. One of the merits of PCR reaction is the less requirement of purification process of the DNAs and that relatively small amount of template DNA is sufficient. We tried to maximize sample size by modifying the experiment process in a short-cut way, particularly focusing on the process of the extraction, PCR or RT-PCR reaction, electrophoresis and the evaluation of target genes. As a result, it became possible to select individuals more than twice at one batch or in one half of conventional periods. Furthermore, the extraction and detection works of RNA became quick and less tedious.
keywords:  Transgenics plant, PCR, Genomic PCR, RT-PCR